光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
光度計由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，根據(jù)這一特性，可對物質進行定性分析。由于物質濃度的不同，吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度也不相同，從而通過對物質吸光度或透過率的測量判定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
光度計使用的方法與步驟：
?。?）預熱儀器：
為使測定穩(wěn)定，將電源開關打開，使儀器預熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。
?。?）選定波長：
根據(jù)實驗要求，轉動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。
?。?）固定靈敏度檔：
根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2～0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
?。?）調(diào)節(jié)“0”點：
輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照）。
?。?）調(diào)節(jié)T=100：
將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100，即，表頭指針恰好指在T=100處。
?。?）測定：
輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進入光路，此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A，讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。
?。?）關機：
實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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